iFluor 488羊抗兔免疫球蛋白应用四步法详解!

iFluor 488羊抗兔免疫球蛋白(通常指二抗,用于Western Blotting等)的4个基本操作步骤简单说明如下:
1. "稀释一抗 (Dilute Primary Antibody):" "做什么:" 将你之前用来标记兔源抗原的一抗(Primary Antibody)用适当的缓冲液(如TBST或TBS)按照推荐浓度或实验优化后的浓度进行稀释。 "目的:" 使一抗在后续步骤中有合适的浓度,能与目标抗原充分结合,同时避免背景过高或信号过弱。
2. "孵育一抗 (Incubate with Primary Antibody):" "做什么:" 将稀释好的的一抗加入已封闭并洗涤过的实验样本(如Western Blot上的膜)中。 "条件:" 在适宜的温湿度下(通常是室温RT或4°C过夜)孵育一段时间(如1-2小时或过夜)。 "目的:" 让一抗有足够的时间特异性地识别并结合到样本中由兔源产生的目标抗原上。
3. "洗涤 (Wash):" "做什么:" 移除未结合或非特异性结合的一抗。通常需要用洗涤缓冲液(如TBST)在摇床上多次(如3-5次)洗涤实验样本。 "目的:"

相关阅读延伸:iFluor 488羊抗兔免疫球蛋白的4个操作步骤简单说明!

标题:iFluor 488羊抗兔免疫球蛋白

【参数信息】

英文名称:iFluor 488羊抗兔免疫球蛋白

中文名称:iFluor 488羊抗兔免疫球蛋白

分子量:~150000

Ex (nm):491

Em (nm):516

规格:200 ug

纯度:≥95%

储存条件:-20℃避光干燥

生产厂商:西安强化生物科技

【简单概述】

iFluor 488 Sheep anti-Rabbit Immunoglobulin (H+L) Fluorescently labeled secondary antibody. AAT Bioquest's iFluor dye is optimized for labeling proteins (particularly antibodies).

These dyes are bright, light stable and have little quenching effect on proteins.

They can be well excited by the main excitation light of the fluorescence instrument. The maximum fluorescence excitation and emission values of iFluor 488 goat anti-rabbit IgG (H + L) conjugate are approximately 491 nm and 514 nm, respectively.

These spectral characteristics make it an alternative to AlexaFluor488 goat anti-rabbit IgG (H + L) conjugate.

iFluor 488羊抗兔免疫球蛋白(H+L)荧光标记二抗,AAT Bioquest的iFluor 染料针对标记蛋白质(特别是抗体)进行了优化。

这些染料是明亮的,光稳定的,并且对蛋白质的淬灭作用小。

它们可以被荧光仪器的主要激发光线很好地激发。iFluor 488山羊抗兔IgG(H + L)偶联物的荧光激发和发射大值分别为〜491 nm和〜514 nm。

这些光谱特性使其成为AlexaFluor488山羊抗兔IgG(H + L)偶联物的替代品。

【操作步骤】

(一)孵育条件:

将稀释后的二抗滴加到已完成一抗孵育的样本(细胞或组织)上。

室温孵育 30分钟(避光操作)。

部分实验可调整至 4°C~37°C 孵育,但室温是标准条件。

(二)清洗:

用 PBS 或 HBSS 缓冲液清洗样本 2-3次,每次5-10分钟,彻底去除未结合抗体。

(三)复染(可选):

若需细胞核染色,可加入DAPI(如100 nM)复染30秒,再用PBS清洗。

(四)封片与观察:

用抗淬灭封片剂(如Fluoromount-G)封片,避光保存。

使用荧光显微镜观察,选择 Ex/Em=491/516 nm(iFluor 488)或标准FITC滤光片。

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本试剂仅适用于科研实验,敬请知悉。

发布于 2025-09-25 20:12
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